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臨床微生物標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的現(xiàn)狀與展望
標(biāo)本的采集及轉(zhuǎn)運(yùn)是臨床微生物實(shí)驗(yàn)室分析前檢驗(yàn)的一個(gè)重要的組成部分，正確的采集及轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)直接關(guān)系到致病菌培養(yǎng)的陽(yáng)性率及正確率的高低，是臨床微生物檢驗(yàn)成功的關(guān)鍵。下面是yjbys小編為大家?guī)?lái)的臨床微生物標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的現(xiàn)狀與展望的知識(shí)，歡迎閱讀。
一、我國(guó)臨床微生物分析前檢驗(yàn)現(xiàn)狀
目前，我國(guó)臨床微生物檢驗(yàn)分析前檢驗(yàn)領(lǐng)域還存在不少問(wèn)題，如很多醫(yī)院都存在標(biāo)本采集方式不正確、運(yùn)送時(shí)間過(guò)長(zhǎng)和儲(chǔ)存溫度不適宜等情況。近年來(lái)，隨著臨床微生物學(xué)者們的呼吁和相關(guān)學(xué)術(shù)討論的深入，臨床微生物分析前檢驗(yàn)的重要性已經(jīng)逐漸被醫(yī)學(xué)同行們所認(rèn)可。目前我國(guó)臨床微生物學(xué)分析前檢驗(yàn)的關(guān)注點(diǎn)主要集中于檢驗(yàn)標(biāo)本是否合格、有無(wú)進(jìn)行不合格標(biāo)本的退檢及與臨床的溝通等，而影響臨床微生物檢驗(yàn)結(jié)果的一個(gè)重要因素———標(biāo)本轉(zhuǎn)送容器的質(zhì)量卻很少受到關(guān)注。
與臨床生物化學(xué)、臨床免疫學(xué)和臨床血液學(xué)檢驗(yàn)相比，臨床微生物檢驗(yàn)標(biāo)本類型復(fù)雜，故轉(zhuǎn)運(yùn)容器的制作與標(biāo)準(zhǔn)化也要復(fù)雜得多。臨床生物化學(xué)、臨床免疫學(xué)和臨床血液學(xué)檢驗(yàn)以血標(biāo)本為主，相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)化采血管的制作也已成熟并應(yīng)用于臨床，對(duì)提高檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量以及結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)化具有重要意義。臨床微生物檢驗(yàn)標(biāo)本類型具有多樣性，有固體(如組織)、半固體(如糞便)和不同黏度的流體(如痰、膿、抽吸物、血液和尿液等)。因此，相應(yīng)的存放樣本的容器形狀和大小也具有多樣性�；旧�，在我國(guó)臨床微生物檢驗(yàn)實(shí)際應(yīng)用的標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)容器中，除了血培養(yǎng)瓶得到標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范之外，其他類型的標(biāo)本采集和轉(zhuǎn)送系統(tǒng)或多或少都存在一些問(wèn)題，如轉(zhuǎn)運(yùn)容器密封性不夠、未達(dá)到無(wú)菌要求和容易出現(xiàn)泄露等，極大地影響了臨床微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量。
由于不同標(biāo)本黏稠度差異較大，臨床操作與相應(yīng)的處理就比較困難。近年來(lái)這一難題已有所突破，通過(guò)液基微生物學(xué)將各種類型的微生物標(biāo)本轉(zhuǎn)化為溶液，可以實(shí)現(xiàn)臨床各種標(biāo)本的標(biāo)準(zhǔn)化，相關(guān)產(chǎn)品也不斷問(wèn)世。而國(guó)內(nèi)對(duì)臨床微生物標(biāo)本采集拭子和運(yùn)輸系統(tǒng)的質(zhì)量以及采集效率的關(guān)注很少，目前所采用的標(biāo)本采集及運(yùn)輸?shù)墓ぞ咻^簡(jiǎn)單，多為傳統(tǒng)的纖維拭子、普通的塑料無(wú)菌容器等，不能保證病原菌在運(yùn)送過(guò)程中的活力，嚴(yán)重影響了臨床微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量。特別是現(xiàn)在越來(lái)越多的醫(yī)院開始使用自動(dòng)化的氣動(dòng)物流標(biāo)本傳輸系統(tǒng)，轉(zhuǎn)運(yùn)容器密封性差，經(jīng)常出現(xiàn)標(biāo)本泄露，嚴(yán)重影響檢驗(yàn)質(zhì)量，檢驗(yàn)人員也日益意識(shí)到標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)質(zhì)量的重要性。同時(shí)，臨床微生物檢驗(yàn)一個(gè)重要的發(fā)展方向是自動(dòng)化，而目前五花八門的轉(zhuǎn)運(yùn)容器無(wú)法適應(yīng)這一發(fā)展趨勢(shì)。因此，現(xiàn)代檢驗(yàn)的氣動(dòng)物流標(biāo)本運(yùn)輸系統(tǒng)及臨床微生物檢驗(yàn)全自動(dòng)化發(fā)展方向均呼吁臨床微生物檢驗(yàn)領(lǐng)域采用高質(zhì)量的標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)。
二、新型標(biāo)本采集及轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)
1. 尿液標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)：目前應(yīng)用較多新型的尿液轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)主要為Uriswab尿液收集系統(tǒng)以及Vacutainer Plus Urine C&S Preservative Tubes。Uriswab尿液收集系統(tǒng)是主要由海綿拭子組成，海綿中含有硼酸和甲酸鈉的聚合物，接觸到尿液會(huì)進(jìn)行活化，可減少運(yùn)輸過(guò)程中出現(xiàn)菌群過(guò)度生長(zhǎng)或過(guò)度死亡的現(xiàn)象。此系統(tǒng)操作簡(jiǎn)單，安全且無(wú)泄漏，在冷藏或室內(nèi)溫度下保持細(xì)菌生存力可達(dá)48 h。另一種新型的尿液采集轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)為Vacutainer Plus Urine C&S Preservative Tubes，它自帶凍干粉保存劑(硼酸緩沖液、甲酸鈉和硼酸鈉)，可使尿液在非冷藏條件下儲(chǔ)存48 h。
2. 痰標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)：痰標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)制作最大的難點(diǎn)為痰標(biāo)本具有明顯的非均質(zhì)性，細(xì)菌等成分的分布濃度很不均勻，故痰液稀釋在微生物分離培養(yǎng)中有重要意義。傳統(tǒng)的胰酶預(yù)處理痰液的方法，耗時(shí)較長(zhǎng)，應(yīng)用液在常溫下不易保存，且反復(fù)凍融容易失效，往往需現(xiàn)配現(xiàn)用。a-糜蛋白酶溶液消化所需時(shí)間更短，但成本較高。新型的痰標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)采用的是SL solution來(lái)進(jìn)行痰標(biāo)本液化，其有效成分是二硫蘇糖醇(dithiothreitol, DTT)，其溶解痰液的溶劑裝在無(wú)菌塑料管里，無(wú)須再進(jìn)行水化，且其在室溫下穩(wěn)定，保質(zhì)期長(zhǎng)，可以隨取隨用，方便檢驗(yàn)人員的臨床操作。
3. 糞便標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)：FecalSwab是一種采集、運(yùn)輸、儲(chǔ)存便樣的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，其配方是為保持腸桿菌科細(xì)菌的生存力而特別設(shè)計(jì)。其專門設(shè)計(jì)的植絨拭子，可以精準(zhǔn)地采集標(biāo)本。用途較廣，樣本可以直接在血培養(yǎng)皿上進(jìn)行畫線或者分離，也可以分為等份試樣后轉(zhuǎn)移至選擇性增菌培養(yǎng)液中再進(jìn)行操作，可用于PCR。有研究表明，F(xiàn)ecalSwab在保持糞便中病原體活力方面較Eswab及其他常用的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)(如干燥容器及Amies凝膠拭子)有明顯優(yōu)勢(shì)。
4. 細(xì)胞及核酸標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)：Cymol是一種用于細(xì)胞及核酸的運(yùn)輸和儲(chǔ)存的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)。三種酒精混合液有利于標(biāo)本的保存，并可抑制普通菌群過(guò)度生長(zhǎng)�；|(zhì)可保持核酸的穩(wěn)定性，可通過(guò)基于RNA與DNA的分子核酸檢測(cè)，檢測(cè)人乳頭瘤病毒、衣原體和淋病奈瑟菌。Enat是一種為分子生物應(yīng)用而設(shè)計(jì)的運(yùn)送核酸的系統(tǒng)，配方中加入了去污劑，保證樣本達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。還可對(duì)傳染性病原體進(jìn)行滅活，降低檢驗(yàn)人員接觸未知病毒的風(fēng)險(xiǎn)。
5. 病毒標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)：新型通用病毒采集運(yùn)輸系統(tǒng)可用于病毒、支原體、衣原體及脲原體的采集運(yùn)輸�？稍谑覝鼗虮�(2-25 ℃)儲(chǔ)存病原體至少48 h。含有低溫防護(hù)劑用于病毒及支原體在冰上的保存，基質(zhì)內(nèi)含抑制細(xì)菌及真菌生長(zhǎng)的抗菌藥物以防止污染。
6. 其他轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)：2005年研發(fā)的Eswab拭子，是目前微生物技術(shù)較先進(jìn)的運(yùn)輸系統(tǒng)，它能在室溫和冰箱溫度下保持需氧菌、厭氧菌和苛養(yǎng)菌生存力長(zhǎng)達(dá)48 h，是一種多用途液基采集儲(chǔ)存系統(tǒng)。Eswab由一個(gè)植絨拭子和一個(gè)1 ml的Amies液體管組成使樣本采集過(guò)程的損傷變得更低，并且能收集更多的樣本，立即洗脫進(jìn)液相中以進(jìn)一步多重分析。有學(xué)者報(bào)道：Eswab中病原菌的復(fù)蘇率是其他轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)(MaxV和Remel BactiSwab)的十倍以上。
三、不同標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)比較研究
目前，關(guān)于不同標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的比較研究，只有來(lái)自國(guó)外學(xué)者的研究資料。不同的病原菌、轉(zhuǎn)運(yùn)溫度及轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間對(duì)于轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的要求也有所不同。用無(wú)炭的Amies瓊脂凝膠轉(zhuǎn)運(yùn)金黃色葡萄球菌，細(xì)菌活力最長(zhǎng)可達(dá)18 d;Gladstone等對(duì)105篇文章做出的Meta分析顯示：對(duì)于肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)運(yùn)，尼龍植絨拭子在標(biāo)本的吸收和釋放方面有較好作用;而在轉(zhuǎn)運(yùn)介質(zhì)方面，WHO推薦的牛奶、胰蛋白胨、葡萄糖、甘油組成的介質(zhì)(STGG)比只有牛奶，葡萄糖及甘油組成的介質(zhì)(SGG)有較高的復(fù)蘇率。在對(duì)于厭氧菌的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中，采用Eswab轉(zhuǎn)運(yùn)的標(biāo)本，其細(xì)菌的復(fù)活率都明顯高于MaxV系統(tǒng)和RBS系統(tǒng)。Hirvonen和Kaukoranta對(duì)12株ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株及328株臨床糞便標(biāo)本的研究發(fā)現(xiàn)：Eswab和FecalSwab優(yōu)于傳統(tǒng)的標(biāo)本轉(zhuǎn)送系統(tǒng)(Amies gel swabs和dry containers)，Eswab更適合糞便標(biāo)本的采集與轉(zhuǎn)送，但FecalSwab在不同溫度的標(biāo)本保存方面具有較明顯的優(yōu)勢(shì)。
在不同的環(huán)境下宜選擇不同的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)。有研究發(fā)現(xiàn)同是針對(duì)厭氧菌的Port-A-Cul轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)
與COMP傳統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，在4℃時(shí)，兩者在保持細(xì)菌活力方面都具有較好的作用;而在室溫下，Port-A-Cul轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)就比COMP傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)有明顯優(yōu)勢(shì)。當(dāng)樣品不能得到及時(shí)的處理或冷藏時(shí)，ETA比Amies和Stuarts培養(yǎng)基有較明顯優(yōu)勢(shì)。
四、標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)在多重耐藥菌株分離中的應(yīng)用
新型的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)對(duì)于多重耐藥(Multidrug resistance, MDR)菌株的分離有重要的意義。有研究表明，Eswab在轉(zhuǎn)移多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌時(shí)，其在0、1、24和48 h的復(fù)活率均明顯高于普通的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)(standard swab system, SSS)2倍以上。即使是在轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間延長(zhǎng)或者接種液較少的情況下，Eswab轉(zhuǎn)運(yùn)的標(biāo)本，其病原體仍然能保持較高的復(fù)活率。在冰凍的情況下，接種可至少延遲2周。Lerner等學(xué)者成功將Eswab轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)用于碳青霉烯耐藥腸桿菌科細(xì)菌(carbapenem-ressistant Enterobacteriaceae, CRE)的分離培養(yǎng)，取得了較好的效果。Smismans等將Eswab轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)應(yīng)用于MRSA菌株的分離，并取得了Venturi swab轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)3.6倍的標(biāo)本采集與復(fù)蘇效率。可見，新型標(biāo)本采集與運(yùn)送系統(tǒng)在多重耐藥的分離中也發(fā)揮著重要作用。
五、標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的未來(lái)發(fā)展展望
近年來(lái)，微生物檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化已成為各個(gè)實(shí)驗(yàn)室的發(fā)展方向。自動(dòng)化的檢驗(yàn)?zāi)軌蛱岣邫z驗(yàn)質(zhì)量，提高檢驗(yàn)效率，減少人為誤差，并能夠節(jié)省人力，提高生物安全性等。采用方便、快捷、高性能的標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)在自動(dòng)化的進(jìn)程有重要意義。標(biāo)本采集與運(yùn)送系統(tǒng)領(lǐng)域未來(lái)的發(fā)展與研究將集中于：(1)進(jìn)一步立足臨床需求，開發(fā)與完善臨床微生物標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，提升臨床微生物檢驗(yàn)質(zhì)量;(2)進(jìn)一步評(píng)估不同標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)在不同目標(biāo)病原菌、不同標(biāo)本運(yùn)送溫度和不同儲(chǔ)存溫度下的差異，以根據(jù)實(shí)際情況合理選擇適合所在實(shí)驗(yàn)室的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng);(3)研究不同標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)在感染控制中的應(yīng)用，特別是多重耐藥菌的分離。
我國(guó)臨床微生物學(xué)家對(duì)微生物標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)加強(qiáng)了重視，各個(gè)醫(yī)院也都意識(shí)到標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的重要性，制定了微生物標(biāo)本采集手冊(cè)與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)相關(guān)的操作指南。目前，制約標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的發(fā)展的一個(gè)重要因素為臨床微生物檢驗(yàn)的收費(fèi)問(wèn)題。國(guó)內(nèi)的微生物檢驗(yàn)成本較高，收費(fèi)較低，缺乏資金使得微生物實(shí)驗(yàn)室在改進(jìn)標(biāo)本采集和轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的過(guò)程中舉步維艱。筆者建議在目前的收費(fèi)系統(tǒng)中增加單收材料費(fèi)，這有利于臨床微生物檢驗(yàn)質(zhì)量的提升。希望本文的介紹可以推動(dòng)各種新型轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)在我國(guó)臨床微生物檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用，進(jìn)一步提升臨床微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量，促進(jìn)微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化及自動(dòng)化的發(fā)展。同時(shí)，也希望中國(guó)臨床微生物學(xué)者積極關(guān)注新型標(biāo)本采集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，進(jìn)行臨床研究、評(píng)估與應(yīng)用，并總結(jié)相關(guān)經(jīng)驗(yàn)與資料，向國(guó)際同行展示來(lái)自中國(guó)的循證臨床微生物學(xué)資料，提升中國(guó)臨床微生物界在國(guó)際上的影響力!
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